O ensino de Biologia está relacionado, tanto aos espaços formais quanto aos nãoformais de educação. Esses espaços educativos, quando utilizados complementarmente, podem contribuir para a promoção da interdisciplinaridade, da regionalização do currículo e da abordagem de temas transversais. Contudo, essas dimensões se tornam desafiadoras ao professor quando pretende referenciar o ensino em práticas investigativas. Neste trabalho de conclusão de Mestrado, relatam-se as experiências vivenciadas pela autora ao desenvolver um roteiro pedagógico, envolvendo sequências didáticas investigativas para o ensino de Biologia, envolvendo aulas de campo em espaços não-formais tendo como referência os diferentes ambientes naturais e construídos do Parque Estadual de Itaúnas (PEI). O referencial teórico se fundamentou em literaturas que dialogam sobre educação formal, nãoformal e informal com ênfase nas Unidades de Conservação, além do universo conceitual que referencia o ensino por investigação. Os participantes das atividades didáticas desenvolvidas foram estudantes da 3ª série do ensino médio, matriculados no ano de 2019, do turno vespertino, da Escola Estadual de Ensino Fundamental e Médio (EEEFM) "Ceciliano Abel de Almeida" do município de São Mateus - ES; professores de Biologia; e condutores ambientais de Itaúnas. Seu desenvolvimento consistiu de uma pesquisa qualitativa, do tipo pesquisa-ação e os procedimentos de coletas de dados consistiram de observações, anotações e registros em diário de bordo. Estes foram organizados, categorizados e analisados por meio da análise textual discursiva, com o intuito de validar um caderno de sequências didáticas como ferramenta auxiliar às aulas de campo. A partir das Sequências Didáticas Investigativas (SDI's) reafirma-se o potencial dos conteúdos da Biologia para integração dos espaços de educação formais e não-formais. Constatou-se que as sequências didáticas executadas contribuíram à formação do olhar investigativo dos estudantes, quando executadas sob a perspectiva do ensino por investigação. Além disso, possibilitaram a abordagem de aspectos da realidade socioambiental, regional e transversalização da educação ambiental no ensino de Biologia. Quanto às dificuldades encontradas para desenvolvimento das SDI's, destaca-se o tempo reduzido da carga horária disponibilizada para o ensino de Biologia. A experiência vivenciada com o desenvolvimento das 6 SDI's, serviu de base à elaboração de ummaterial de apoio ao professor que contribuiu para utilização dos espaços do PEI para o desenvolvimento do ensino de Biologia, pautado em atividades investigativas e contribuições para a regionalização do currículo.