As rodovias desempenham um papel importante no desenvolvimento econômico de uma região, pois transportam matérias-primas e produtos, além da própria população que as utilizam para realizar diferentes tarefas no dia a dia. Por outro lado, as rodovias também estão relacionadas a aspectos negativos, causando diversos impactos socioambientais como os acidentes de trânsito, atropelamento de animais silvestres, fragmentação de ecossistemas, entre outros. A Ecologia de Estradas é uma disciplina que surgiu com o intuito de discutir sobre os impactos socioambientais causados pelas rodovias e de buscar soluções para esses impactos. Por ser uma disciplina relativamente nova, a Ecologia de Estradas ainda é pouco conhecida no contexto escolar. O presente trabalho teve como finalidade relacionar a Ecologia de Estradas, Educação Ambiental e o Educar pela Pesquisa nos processos de ensino- aprendizagem do Ensino de Biologia. Para isso buscou-se fazer uma revisão de literatura sobre Ecologia de Estradas e também, através de uma sequência didática, valorizar os conhecimentos prévios dos estudantes de uma turma de 3° ano do ensino médio acerca dos impactos socioambientais causados pela duplicação da rodovia BR-280, localizada na região Norte do estado de Santa Catarina. Na revisão de literatura foram identificados 26 artigos publicados entre os anos de 2010 e 2019, com a maioria das publicações realizadas entre 2014 e 2017, principalmente na região Sudeste do país. Os conteúdos dos artigos foram separados em três temáticas distintas: atropelamentos da fauna silvestre, fragmentação de habitats e medidas de mitigação. Foi observado que poucos estudos faziam correlações entre a Ecologia de Estradas, a Educação Ambiental e o Educar pela Pesquisa. Com relação a sequência didática aplicada em sala de aula, foram desenvolvidas diversas atividades relacionadas a Ecologia de Estradas, os diálogos e textos produzidos pelos estudantes evidenciaram que o envolvimento e o interesse pelas aulas aumentou e o conhecimento foi consolidado. Com base nos resultados obtidos foi desenvolvido um roteiro com sugestões de atividades que possam ser utilizadas por outros professores de biologia para inserir a temática de Ecologia de Estradas em sala de aula.